Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)

虾碱性磷酸酶

                                                                      虾碱性磷酸酶

描述

       虾碱性磷酸酶(SAP)能够简单快速地催化DNA、RNA、核苷酸及蛋白质等去除5‘-磷酸基团,广泛用于很多分子生物学应用中。1993年,ArcticZymes率先推出SAP产品,最初从北极虾(Pandalus borealis)分离;2010年起,推出重组表达形式SAP。SAP的重组生产,提高存储稳定性、降低批间差异、提高酶比活性。

       相比于其他SAP,如E.coli或牛小肠等来源还需通过抽提操作达到去除效果;而ArcticZymes的SAP在65℃孵育5分钟,能够完全失活。因此,ArcticZymes的SAP使用最为方便,市场占有率最高。

 

优势

1. 65℃孵育5分钟,能够完全、不可逆失活;

2. 兼容所有限制性内切酶反应体系;

3. 无需载体纯化操作;

4. 提供glycerol-free形式;

5. 生产流程遵循ISO13485质量管理体系。


应用

1. 构建克隆过程去除磷酸基团,减少空载体的出现;

2. PCR产物酶纯化法(clean-up)。

 

使用指导

虾碱性磷酸酶


数据

      1. 完全不可逆热灭活

      65℃、5分钟或75℃、1分钟,SAP酶完全不可逆失活。在一个标准PCR热循环中,即从37℃到95℃再回到37℃的过程,足以使SAP完全不可逆失活。

虾碱性磷酸酶

Figure 1. 65℃及75℃条件下SAP的活性变化。


2. 序前PCR产物酶纯化法(clean-up

        测序前PCR产物的酶纯化法减少了对耗时的纯化操作的需要,常规纯化方法通过凝胶、柱或磁珠等载体进行。简单地添加SAP和Exonuclease I到PCR产物中,37℃孵育10分钟即可消化过量的引物和核苷酸。最终,两种酶都被加热灭活,PCR产物进行测序。该处理可以在单个反应管中完成,因此不需要进一步处理。对于非常短的PCR产物,酶纯化法也能100%回收。PCR产物的酶纯化法在基因分型和基于质谱的分析中也可能有用。

虾碱性磷酸酶

Figure 2. 测序前PCR产物的酶纯化法能够提高测序结果质量。用SAP和Exonuclease I(A)和不用两种酶(B)进行PCR产物纯化,测序结果对比。


酶学特征

 

来源:Pichia pastoris重组表达

酶比活:>2000 Units/mg

酶活定义:37℃条件下,一个单位的SAP酶是指在0.1M Glycine缓冲液pH 10.4、1 mM ZnCl2、1 mM MgCl2及6 mM 4-硝基苯基磷酸盐溶液中,将1 µmol的对硝基苯基磷酸盐转化为硝基苯酚和磷酸盐所需的酶量。依据该酶活定义,1 U SAP的活性等同于5-40 U的Antarctic Phosphatase(NEB,M0289),1.3 U Apex phosphatase 或 35 U NTPhos phosphatase(Epicentre Biotechnologies,NT4910)。

纯度:DNase活性未检出。

浓度:≥10000 U/ml,一般在30000 U/ml左右;

灭活条件:65℃、5分钟或75℃、1分钟,完全不可逆失活。在一个标准PCR热循环中,即从37℃到95℃再回到37℃的过程,足以使SAP完全不可逆失活。

稳定性:长期保存,建议-20℃保存;室温下,3个月后活性>95%。冻存液:25 mM Tris-HCl pH 7.6, 5 mM MgCl2, 50% glycerol。

  

References

Generating In Vivo Cloning Vectors for Parallel Cloning of Large Gene Clusters by Homologous Recombination. Lee J, Rha E, Yeom SJ, Lee DH, Choi ES and Lee SG. PLoS One. 2013; 8(11): e79979.

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Highly multiplexed genotyping of thiopurine s-methyltransferase variants using MALD-TOF mass spectrometry: reliable genotyping in different ethnic groups. Schaeffeler E, Zanger UM, Eichelbaum M, Asante-Poku S, Shin JG, Schwab M. Clin Chem. 2008; 54(10): 1637-47.


订购信息


货号

描述

规格

浓度

储存条件

70700-201

Shrimp Alkaline Phosphatase

1000 U

1 U/µl

-20 

70700-202

Shrimp Alkaline Phosphatase

5000 U

1 U/µl

-20 

70710-201

SAP Glycerol-free

5000 U

>20 U/µl

-20


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