Heat&Run gDNA Removal kit

基因组DNAgDNA)去除试剂

                                                                                                                                                   基因组DNA(gDNA)去除试剂盒

描述

  逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和定量RT-qPCR(RT-qPCR)是检测和定量RNA常用的方法,广泛应用于分子研究和临床诊断领域。但这两种方法的问题是不能区分cDNA和基因组DNA,这可能导致假阳性出现;在RT-qPCR中,这也会影响RNA定量的准确性。

  在RT-qPCR中,基因组DNA污染有多个可能的来源。其中,最常见的来源之一是用于RNA提取的细胞。通常,PCR引物都是跨内含子设计的,目的是特异性地扩增cDNA。除非内含子长度足够,否则污染的gDNA仍可能竞争结合引物和探针,从而导致假阳性。此外,经过处理的假基因也可能是假阳性的一个重要来源。这些假基因不含内含子,与cDNA序列相同。因此,在RT-PCR和RT-qPCR中,在扩增前去除任何污染DNA都是必须的。

  从RNA中去除基因组DNA污染最常用的方法之一是DNase I处理,而65℃灭活DNase I的同时会损失目的RNA。我们推出一款简便、快捷的方法——Heat&Run gDNA去除试剂,基于HL-dsDNase具有的低温活性及热不稳定性等优点,——室温孵育去除gDNA污染,升温到50℃灭活HL-dsDNase,同时激活反转录酶活性。

 

优势

1.   gDNA去除与反转录(RT)可在同一支管中完成,提高RNA得率;

2.     得到高纯度RNA进行qPCR;

3.     兼容市售绝大多数RT试剂;

4.     操作简便,减少操作次数,降低污染风险;

5.     特别适合高通量实验

 

推荐应用

1.   RT-PCR及RT-qPCR应用;

2.     单细胞RNA测序;

3.     Trizol法分离RNA。

 

组分及特性

1.   HL-dsDNase:双链特异性DNA酶,具有低温活性及热不稳定性;58℃、5分钟,不可逆失活;

2.    10x Reaction Buffer:提供HL-dsDNase酶切体系。

 

使用指导

与传统的DNase I处理相比,gDNA去除试剂操作简单、快速高效、gDNA去除彻底且提高RNA得率。

基因组DNA(gDNA)去除试剂盒 基因组DNA(gDNA)去除试剂盒


数据


gDNA去除不影响mRNA定量

基因组DNA(gDNA)去除试剂盒

Figure 1. 用gDNA去除试剂处理SDHA(mRNA)及gDNA两个实验组,对照组不用试剂处理。用RT-PCR定量分析。

 

References

Metagenomic analysis of thevirome of mosquito excreta. Ramírez AL, Colmant AMG, Warrilow D, Huang B, Pyke AT, McMahon JL, Meyer DB, Graham RMA, Jennison AV, Ritchie SA, van den Hurk AF. mSphere. 2020; 5(5): e00587-20.

Performance assessment of total RNA sequencing of human biofluids and extracellular vesicles. Everaert C, Helsmoortel H, Decock A. Scientific Reports. 2019; 9, 17574.

Illumina sequencing of clinical samples for virus detection in a public health laboratory. Huang B, Jennison A, Whiley D. Scientific Reports. 2019; 9, 5409.

订购信息


货号

描述

规格

浓度

储存条件

70800-201

热不稳定性双链特异性DNAHL-dsDNase

250 U

2 U/µl

-20 ℃

70800-202

热不稳定性双链特异性DNAHL-dsDNase

1000 U

2 U/µl

-20 ℃

70801-201

热不稳定性双链特异性DNA酶,不含Triton

               (HL-dsDNase, Triton FREE)

250 U

2 U/µl

-20 ℃

70801-202

热不稳定性双链特异性DNA酶,不含Triton

               (HL-dsDNase, Triton FREE)

1000 U

2 U/µl

-20 ℃

80200-50

基因组DNA去除试剂

                (Heat&Run gDNA removal kit

50 rxn

/

-20 ℃

80200-250

基因组DNA去除试剂

                (Heat&Run gDNA removal kit

250 rxn

/

-20 ℃



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