PCR Decontamination Kit

PCR去污染试剂

 

描述

          在研究和诊断中,PCR是一种检测DNA是否存在的敏感方法。PCR中使用的聚合酶经常被E.coli DNA污染。当靶向少量细菌DNA时,污染的DNA可能导致灵敏度降低和假阳性。其他污染源可能是dNTPs、缓冲体系、引物/探针,以及操作过程中引入的DNA。

       对细菌的检测和分型可以采用以16S或23S rDNA基因保守区段为靶点的广谱范围探针。该方法对细菌DNA污染非常敏感,而大多数mastermix和聚合酶中都发现细菌DNA的痕迹(Figure 1)。当使用qPCR检测或定量少量的细菌DNA时,污染的E.coli DNA可能会导致假阳性结果。


PCR去污染试剂盒 (PCR Decontamination Kit)

Figure 1. 多个品牌的PCR Master mix中检出E.coli 23S rDNA。反应体系是多品牌的Master mix、23S DNA探针和水(不加模板)。实验组的所有Master mix都能检出痕量的E.coli 23S DNA,Cq值介于30-35。

 

       为了解决这个问题,我们开发出PCR去污染试剂,既能去除mastermix中细菌DNA污染,又不影响PCR反应的灵敏度。此外,该试剂无RNase活性。


优势

1. 很容易去除PCR mastermix中的DNA污染;

2. 减少背景污染,提高目标基因检测下限;

3. 不影响PCR检测灵敏度;

4. 用于终点PCR和探针依赖的qPCR;

5. 简单易用,操作方便。

 

组分及特性

1. dsDNase:双链特异性DNA酶,去除mastermix、引物及探针等的污染DNA;

2. DTT:60℃条件下,能够不可逆灭活dsDNase,确保模板DNA不被清除。


使用指导

PCR去污染试剂盒 (PCR Decontamination Kit)




1.  将引物、探针及mastermix和PCR去污染试剂混合在一起;

2. 37℃条件下孵育20分钟;(去除DNA污染)

3.  60℃条件下孵育20分钟;(灭活dsDNase

4.  加入模板,并运行qPCR程序。

(左图: 20 µl反应体系为例)






不降低反应灵敏度

       DNA污染主要是高灵敏度应用面对的问题。这些应用,以低丰度DNA为目标检测基因,极易受到污染DNA的干扰。因此,任何影响qPCR灵敏度的去除DNA污染的方法,都是不能使用的。


PCR去污染试剂盒 (PCR Decontamination Kit)

Figure 2. 用PCR去污染试剂处理/未处理的mastermix、5个10倍梯度稀释的gDNA和水(NTC)为模板进行qPCR检测。与NTC untreated组相比,NTC decontaminated组在45个cycle仍然没有信号,说明PCR去污染试剂能最大程度去除mastermix中的污染。PCR去污染试剂处理前/后数据相比,Cq值并没有明显改变,说明基本不影响反应灵敏度。

订购信息


货号

描述

规格

浓度

储存条件

70600-201

双链特异性DNA酶(dsDNase

250 U

2 U/µl

-20 ℃

70600-202

双链特异性DNA酶(dsDNase

1000 U

2 U/µl

-20 ℃

80400-100

PCR去污染试剂PCR Decontamination Kit

100 rxn

/

-20 ℃

80400-500

PCR去污染试剂PCR Decontamination Kit

500 rxn

/

-20 ℃


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