Double-strand specific DNases

双链特异性DNA酶家族

 

描述

       双链特异性DNA酶(dsDNases)是一种独特的双链特异性内切酶。由于它们不能水解单链DNA(ssDNA)或RNA,可以在其他核酸存在的情况下,专门用dsDNases来去除双链DNA(dsDNA)。该酶类的热不稳定性,使它们更适用于DNase必须灭活的应用中。该酶类包含两种,分别是dsDNase和HL-dsDNase。


底物特异性

dsDNases对不同类型DNA及RNA的酶切活性数据(反应条件:25 mM Tris pH 7.5, 5 mM MgCl2, 2 µM Oligonucleotide)。

双链特异性DNA酶家族


酶学特征


dsDNase

HL-dsDNase

来源

Pichia pastoris重组表达

Pichia pastoris重组表达

热灭活

65 15min 60 20min1mM DTTpH8条件下完全灭活

58 5min1mM DTTpH8条件下完全灭活

酶活定义

一个单位酶量是指在100 mM乙酸钠(pH 5.0)、5 mM MgCl2反应体系中,酶切50 µg/ml高分子量DNA,每分钟引起260nm0.001吸光值变化对应的酶量。

一个单位酶量是指在100 mM乙酸钠(pH 5.0)、5 mM MgCl2反应体系中,酶切50 µg/ml高分子量DNA,每分钟引起260nm0.001吸光值变化对应的酶量。

酶比活

4x10^5 Kunitz Units/mg

2x10^5 Kunitz Units/mg

酶活条件

Effective temperature: 20 - 40 ℃;

                               Optimal pH: 7.5;

                               Mg2+ 2.5 mM

Effective temperature: 20 - 40 ℃;

                                  Optimal pH: 7.5;

                                  Mg2+ 2.5 mM

纯度

apparent homogeneity

apparent homogeneity

储存体系

20 mM Tris-HCl pH 7.5, 2 mM MgCl2, 10 mM NaCl, 0.01% (v/v) Triton X-100, 50% (v/v) glycerol

20 mM Tris-HCl pH 7.5, 2 mM MgCl2, 10 mM NaCl, 0.01% (v/v) Triton X-100, 50% (v/v) glycerol

保质期

4℃存放至少半年,-20℃存放至少3年;该产品耐受多次冻融操作。

-20℃存放至少2年,该产品耐受多次冻融操作。

应用

去除PCR mastermix中的污染

RNA提取中去除gDNA污染


双链特异性DNA内切酶 (dsDNase)


优势

  1. 双链特异性DNA内切酶;

  2. 容易热灭活;

  3. 不能降解引物片段;

  4. 能够从PCR Mastermix中快速去除DNA污染。


描述

       dsDNase是一种内切核酸酶,能够酶切DNA中的磷酸二酯键,产生含有5-磷酸根和3-羟基末端的寡核苷酸。dsDNase具有很高的比活,估计比牛源DNase I30倍。且dsDNase具有热不稳定性质。dsDNase对双链DNA (dsDNA) 有特别强的偏好;在镁作为唯一的二价阳离子条件下,以寡核苷酸为底物,酶切dsDNA的活性比酶切ssDNA的活性高5000倍。因此,这种酶可以用来特异降解dsDNA,使ssDNA基本完整。


热灭活

双链特异性DNA酶家族

Figure 1. 65℃条件下dsDNase的活性变化。65℃条件下,60 Units的dsDNase孵育在200 µl体系中,每隔固定时间取样进行活性检测。


应用:去除PCR MastermixDNA污染


       市售的大部分Taq聚合酶都有细菌DNA污染。DNA污染会产生假阳性结果,——这在基于PCR技术的微生物分型方面是急需解决的问题。dsDNase的特性使其非常适用于DNA模板添加之前去除PCR Mastermix中的DNA污染。如Figure 2所示,先用不同量的dsDNase处理PCR mastermix,然后用广谱性细菌DNA特异引物检测mastermix中残留的细菌DNA。结果表明,只有未处理的PCR mastermix才有DNA背景信号。

双链特异性DNA酶家族

Figure 2. 用0, 0.5, 1及5 Units dsDNase处理PCR体系。所有dsDNase实验组几乎完全去除了DNA,而对照组仍能扩增出阳性结果。


去除PCR MastermixDNA污染流程


双链特异性DNA酶家族


References

Adenosine and hyaluronan promote lung fibrosis and pulmonary hypertension in combined pulmonary fibrosis and emphysema. Collum SD, Molina JG, et al. Disease Models & Mechanisms. 2019;12: dmm038711.

Illumina sequencing of clinical samples for virus detection in a public health laboratory. Huang B, Jenison A, Whiley D, McMahon J, Hewitson G, Grahma R, De Jong A, Warrilow D. Scientific Reports. 2019: 9: 5409.

Analysis of Ancient DNA in Microbial Ecology. Gorgé O, Bennett EA, Massilani D, Daligault J, Pruvost M, Geigl EM, Grange T. Microbial Environmental Genomics (MEG), Methods in Molecular Biology. 2016; 1399:289-315.


订购信息


货号

描述

规格

浓度

储存条件

70600-201

双链特异性DNA酶(dsDNase

250 U

2 U/µl

-20 ℃

70600-202

双链特异性DNA酶(dsDNase

1000 U

2 U/µl

-20 ℃

70601-201

双链特异性DNA酶,不含Triton

                 (dsDNase, Triton FREE)

250 U

2 U/µl

-20 ℃

70601-202

双链特异性DNA酶,不含Triton

                (dsDNase, Triton FREE

1000 U

2 U/µl

-20 ℃

80400-100

PCR去污染试剂PCR Decontamination Kit

100 rxn

/

-20 ℃

80400-500

PCR去污染试剂PCR Decontamination Kit

500 rxn

/

-20 ℃

70800-201

热不稳定性双链特异性DNAHL-dsDNase

250 U

2 U/µl

-20 ℃

70800-202

热不稳定性双链特异性DNAHL-dsDNase

1000 U

2 U/µl

-20 ℃

70801-201

热不稳定性双链特异性DNA酶,不含Triton

               (HL-dsDNase, Triton FREE

250 U

2 U/µl

-20 ℃

70801-202

热不稳定性双链特异性DNA酶,不含Triton

               (HL-dsDNase, Triton FREE

1000 U

2 U/µl

-20 ℃

80200-50

基因组DNA去除试剂

                (Heat&Run gDNA removal kit

50 rxn

/

-20 ℃

80200-250

基因组DNA去除试剂

                (Heat&Run gDNA removal kit

250 rxn

/

-20 ℃



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