Cod Uracil-DNA Glycosylase

Cod UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶)

                                                                         Cod UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶)

描述

  Cod UNG酶能够选择性水解双链或单链DNA中尿嘧啶与脱氧核糖之间的N-糖苷键,形成缺失一个碱基位点(无嘧啶)的DNA链,在碱性溶液及高温条件下会进一步水解断裂,从而被完全水解;且Cod UNG酶对RNA中的尿嘧啶无活性。该酶是PCR、RT-PCR及qPCR等分析方法中消除carry-over污染的理想选择。分子诊断中,即使痕量的DNA污染也能显著降低检测灵敏度,因此,UNG酶在分子诊断领域应用非常广泛。

  与其他来源UNG酶相比,Cod UNG酶具有低温活性、在温和热处理条件下(55℃)完全不可逆失活等优势,能够提高PCR反应的效率及灵敏度,并能提高PCR产物的长期稳定性,便于下游应用,如克隆构建、测序等。此外,在55℃条件下完全不可逆失活,Cod UNG能用于一步RT-qPCR中。

  Cod UNG适用于常见的缓冲体系,兼容多种样本类型。Cod UNG的优异性能,使其易于使用、便于自动化操作、兼容绝大多数工作流程,如PCR、qPCR、RT-PCR等。

  Cod UNG的开发及生产流程符合ISO13485质量体系认证。此外,为了满足欧盟REACH法规要求,ArcticZymes推出Triton X-100 free的产品(Cod UNG Triton FREE);同时,随着应用场景的拓展及行业更高要求的发展,ArcticZymes也推出了glycerol-free的可冻干剂型。


优势

1.  第一款热不稳定的UNG酶,反应更快、温度更低,室温孵育5分钟即可完成;

2.  第一款完全不可逆热灭活的UNG酶(55℃),改善下游应用实验结果;

3.  提高PCR/qPCR检测灵敏度;

4.  兼容多种样本类型,尤其适合PCR诊断应用。

 

推荐应用

1.   用于PCR及RT-PCR中消除carry-over污染;

2.   改善PCR产物的下游应用,如克隆构建、测序等;

3.   反应温度更低,更适于病毒检测;

4.   能用于一步RT-PCR反应。

 

使用指导

Cod UNG能够兼容市售所有master mix。务必确保:PCR体系中含有dUTPPCR产物用于下游分析之前,保存在4℃或-20℃。

Cod UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶)

数据

1.   完全不可逆热灭活

           目前市售有多种商业化的UNG酶,其中大多数是细菌来源。如果不涉及post-PCR的应用,大多数UNG酶都能满足使用要求。然而,如果需要将PCR产物用于下游分析,如克隆构建和测序,那么UNG酶的再激活(reactivation)及随之引起的PCR产物降解是大多数市售UNG酶的一个通用问题。ArcticZymes的Cod UNG酶是目前第一款完全、不可逆热灭活的UNG酶。

Cod UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶)

Figure 1. Cod UNG是唯一一款完全、不可逆热灭活的UNG酶。PCR反应体系包含10mM dATP、dCTP、dGTP和20mM dUTP及1U的UNG酶(Cod UNG及另外4种市售型号)。PCR反应后,室温孵育0hr、1hr、3hr、6hr及24hr,然后agarose-gel分析PCR产物降解情况。

Cod UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶)

Figure 2. 两种UNG处理的PCR产物的测序图谱。室温下,用1U的Cod UNG(A)和1U的E.coli UNG(B)处理PCR产物3hr,然后进行测序分析。由图可知,Cod UNG处理的PCR产物完整性更好、质量更高。


2.   提高qPCR灵敏度 

  在分子诊断的一些应用中,如病原检测,样品中目标分子含量有限,因此检测灵敏度成为非常关键的因素。Carry-over DNA污染严重降低qPCR的检测灵敏度。使用Cod UNG能够保持PCR产物的完整性,并能够去除污染物、恢复灵敏度及检测的动态范围。

Cod UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶)

Figure 3. 制备5个浓度的人血清稀释的RNA病毒样品,各样品中加入含尿嘧啶的扩增序列模拟carry-over DNA污染。使用标准一步法RT-qPCR对RNA定量检测。Carry-over DNA严重降低检测灵敏度(橙色),加入Cod UNG恢复灵敏度(绿色)到与对照组(黄色)一致。


3.   更适于病毒检测

         病毒诊断检测的困难之一是病毒固有的基因组变异。Cod UNG酶活温度范围更宽,其中较低的酶活温度,更适于病毒诊断。降低引物退火的反应温度,引物结合区段错配容忍度增强,——这能检测更多的病毒亚型,减少诊断中假阴性的风险。Cod UNG在环境温度下的高活性,及50℃条件下不可逆失活,成为病毒诊断流程中RT-qPCR的理想组分。

Cod UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶)

Figure 4. 在人total RNA样品中,加入Cod UNG、E. coli UNG及另外两个品牌(A和B)的冷适应UNG,进行RT-qPCR检测。A和B品牌的UNG在50-60℃条件下不能完全失活,降解部分cDNA从而影响了检测灵敏度;E. coli UNG反应温度相对较高(最适温度为50℃左右),影响RNA反转录成cDNA效率,且不能完全失活进而降解部分cDNA。


4.   兼容多种样本类型

       血液样本常用于直接PCR病原检测诊断。实践发现,血液样本的组分通常会抑制PCR中的酶活性,如UNG。Cod UNG能很好耐受全血及血浆中的组分,如血清和抗凝血剂等。由于它能兼容更广泛的生物样本类型,Cod UNG是直接PCR诊断的理想选择。

Cod UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶)

Figure 5. Cod UNG能够兼容多种血液样本组分。多种血液样本组分存在情况下,如血清、EDTA处理的血浆、Na-Heparin处理的血浆、EDTA处理的血液及Na-Heparin处理的血液,检测Cod UNG的活性。


酶学特征

来源:Arctic cod origin, E.coli重组表达

酶比活:>5.00 x 10^5 Units/mg

酶活定义:37℃条件下,一个单位的UNG酶是指1hr内从含尿嘧啶的DNA中释放1nmol尿嘧啶所需的酶量。

纯度:高纯级别,无其他核酸酶活性残留。

热灭活:50-55℃、20分钟,完全不可逆失活。

酶活条件:(Effective是指活性在最优活性10%以上的条件范围)

Condition

Optimal

Effective

pH

7.5

6.5-9.0

NaCl

50 mM

/

Temperature

/

20-40

References


LAMP-based ratiometric electrochemical sensing for ultrasensitive detection of Group B Streptococci with improved stability and accuracy. Fu Y, Zhou X, Duan X, Liu C, Huang J, Zhang T, Ding S, Min X, A. Sensors and Actuators: B. Chemical. 2020; 321:128502

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订购信息


货号

描述

规格

浓度

储存条件

70500-201

Cod UNG, 100 U

100 U

1 U/µl

-20 ℃

70500-202

Cod UNG, 1000 U

1000 U

1 U/µl

-20 ℃

70501-201

Cod UNG Triton FREE, 100 U

100 U

1 U/µl

-20 ℃

70501-202

Cod UNG Triton FREE, 1000 U

1000 U

1 U/µl

-20 ℃

70510-105

Cod UNG Glycerol-free, 5000 U

5000 U

50 U/µl

-20 ℃

70510-150

Cod UNG Glycerol-free, 50 kU

50 kU

50 U/µl

-20 ℃

70511-105

Cod UNG Glycerol-free Triton FREE, 5000 U

5000 U

50 U/µl

-20 ℃

70511-150

Cod UNG Glycerol-free Triton FREE, 50 kU

50 kU

50 U/µl

-20 ℃


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