BestoFectamine Transfection Reagent是一款高效阳离子脂质体转染试剂,通过与质粒或其他形式的核酸结合并形成脂质体微粒,与细胞膜融合而进入细胞。该转染试剂的优势之一在于伴随核酸进入细胞过程中,把对细胞的损害降到最低,提高转染阳性细胞存活率及蛋白表达量。经过一系列优化摸索,BestoFectamine更适用于悬浮细胞体系(如CHO、293等)的瞬转蛋白表达环节。
保存条件
2-8℃保存,有效期12个月。
转染体系
转染条件需要根据不同的细胞类型进行优化,以下供参考:
细胞类型 | 转染时细胞密度 | DNA (ug): BestoFectamine (ul)(推荐) |
HEK293 6E | 1x10^6 cells/ml | 1:4 |
Freestyle 293F | 1x10^6 cells/ml | 1:4 |
Expi293F | 3x10^6 cells/ml | 1:4 |
Freestyle CHO | 1x10^6 cells/ml | 1:4 |
ExpiCHO | 6x10^6 cells/ml | 1:4 |
效果比较

数据1:不同转染试剂在ExpiCHOs细胞中Day5和Day7的表达量对比。在10ml的ExpiCHOs培养体系中,转染前一天接种4 x 10^6 cells,转染用10ug质粒,且质粒与转染试剂比都为1:4。分别用4种转染试剂得到Day 5和Day 7表达量数据(其中,PEI_1和PEI_2是市场上两个品牌的产品,BTB是本产品,EC是T品牌配套试剂)。

数据2:5种序列抗体用ExpiCHOs细胞,分别用BTB及EC转染试剂在Day 9的表达量对比。在10ml的ExpiCHOs培养体系中,转染前一天接种6 x 10^6 cells,转染用20ug质粒,且质粒与转染试剂比都为1:4。5种不同抗体分别用BTB和EC转染试剂转染Day 9的表达量(其中,BTB是本产品,EC是T品牌配套试剂)。
转染步骤
ExpiCHO转染——
1. 转染前一天,用新鲜培养基将细胞传代至密度3-4 x10^6 cells/ml,置于摇床上培养过夜。
2. 转染当天,检测细胞密度及活率,细胞密度应在7-10 x10^6 cells/ml之间,细胞活率应大于95%。
3. 用37℃预热好的新鲜培养基,将细胞培养液稀释至6 x10^6 cells/ml,并混匀。
4. 制备BestoFectamine/质粒复合物:
1) 将BestoFectamine转染试剂颠倒4-5次混匀。
2) 用Opti-MEM将质粒和BestoFectamine转染试剂分别稀释(如30mL规模的转染,分别将30ug质粒和120ul的BestoFectamine转染试剂用1mL的Opti-MEM稀释)混匀并静止5分钟。
3) 将稀释的转染试剂与质粒混合,颠倒5-6次混匀。
5. 将BestoFectamine/质粒复合物室温放置10-20分钟后缓缓滴加到稀释好的细胞中。
6. 转染后的细胞置于37℃,8% CO2的摇床中培养。
7. 转染20小时后根据情况添加补料,培养5-7天后进行收获。
Expi293转染——
1. 转染前一天,用新鲜培养基将细胞传代至密度2.5-3 x10^6 cells/ml,置于摇床上培养过夜。
2. 转染当天,检测细胞密度及活率,细胞密度应在4.5 -5.5 x10^6 cells/ml之间,细胞活率应大于95%。
3. 用37℃预热好的新鲜培养基,将细胞培养液稀释至3 x10^6 cells/ml,并混匀。
4. 制备BestoFectamine/质粒复合物:
1) 将BestoFectamine转染试剂颠倒4-5次混匀。
2) 用Opti-MEM将质粒和BestoFectamine转染试剂分别稀释(如30mL规模的转染,分别将30ug质粒和120ul的BestoFectamine转染试剂用1mL的Opti-MEM稀释)混匀并静止5分钟。
3) 将稀释的转染试剂与质粒混合,颠倒5-6次混匀。
5. 将BestoFectamine/质粒复合物室温放置10-20分钟后缓缓滴加到稀释好的细胞中。
6. 转染后的细胞置于37℃,8% CO2的摇床中培养。
7. 转染20小时后根据情况添加补料,培养5-7天后进行收获。
订购信息——
货号 | 描述 | 规格 | 储存条件 |
BTB-T01-010 | BestoFectamine Transfection Reagent, 4ml | For 1L culture | 2-8℃ |
BTB-T01-100 | BestoFectamine Transfection Reagent, 10*4ml | For 10L culture | 2-8℃ |