BestoFectamine转染试剂


一款高效阳离子脂质体转染试剂,通过与质粒或其他形式的核酸结合并形成脂质体微粒,与细胞膜融合而进入细胞。


相比其他转染试剂,优势如下——

1. 化学成份安全,对细胞损害较小,转染阳性细胞存活率高、蛋白表达量高;

2. 经过优化,更适用于ExpiCHO、Expi293等悬浮高密度细胞蛋白表达体系。


BestoFectamine Transfection Reagent是一款高效阳离子脂质体转染试剂,通过与质粒或其他形式的核酸结合并形成脂质体微粒,与细胞膜融合而进入细胞。该转染试剂的优势之一在于伴随核酸进入细胞过程中,把对细胞的损害降到最低,提高转染阳性细胞存活率及蛋白表达量。经过一系列优化摸索,BestoFectamine更适用于悬浮细胞体系(如CHO、293等)的瞬转蛋白表达环节。


保存条件

2-8℃保存,有效期12个月。


转染体系

转染条件需要根据不同的细胞类型进行优化,以下供参考:

细胞类型

转染时细胞密度

DNA (ug): BestoFectamine (ul)(推荐)

HEK293 6E

1x10^6 cells/ml

1:4

Freestyle 293F

1x10^6 cells/ml

1:4

Expi293F

3x10^6 cells/ml

1:4

Freestyle CHO

1x10^6 cells/ml

1:4

ExpiCHO

6x10^6 cells/ml

1:4


效果比较


BestoFectamine转染试剂

数据1:不同转染试剂在ExpiCHOs细胞中Day5和Day7的表达量对比。在10ml的ExpiCHOs培养体系中,转染前一天接种4 x 10^6 cells,转染用10ug质粒,且质粒与转染试剂比都为1:4。分别用4种转染试剂得到Day 5和Day 7表达量数据(其中,PEI_1和PEI_2是市场上两个品牌的产品,BTB是本产品,EC是T品牌配套试剂)。


BestoFectamine转染试剂

数据2:5种序列抗体用ExpiCHOs细胞,分别用BTB及EC转染试剂在Day 9的表达量对比。在10ml的ExpiCHOs培养体系中,转染前一天接种6 x 10^6 cells,转染用20ug质粒,且质粒与转染试剂比都为1:4。5种不同抗体分别用BTB和EC转染试剂转染Day 9的表达量(其中,BTB是本产品,EC是T品牌配套试剂)。


转染步骤


ExpiCHO转染——

1. 转染前一天,用新鲜培养基将细胞传代至密度3-4 x10^6 cells/ml,置于摇床上培养过夜。

2. 转染当天,检测细胞密度及活率,细胞密度应在7-10 x10^6 cells/ml之间,细胞活率应大于95%。

3. 用37℃预热好的新鲜培养基,将细胞培养液稀释至6 x10^6 cells/ml,并混匀。

4. 制备BestoFectamine/质粒复合物:

1) 将BestoFectamine转染试剂颠倒4-5次混匀。

2) 用Opti-MEM将质粒和BestoFectamine转染试剂分别稀释(如30mL规模的转染,分别将30ug质粒和120ul的BestoFectamine转染试剂用1mL的Opti-MEM稀释)混匀并静止5分钟。

3) 将稀释的转染试剂与质粒混合,颠倒5-6次混匀。

5. 将BestoFectamine/质粒复合物室温放置10-20分钟后缓缓滴加到稀释好的细胞中。

6. 转染后的细胞置于37℃,8% CO2的摇床中培养。

7. 转染20小时后根据情况添加补料,培养5-7天后进行收获。


Expi293转染——

1. 转染前一天,用新鲜培养基将细胞传代至密度2.5-3 x10^6 cells/ml,置于摇床上培养过夜。

2. 转染当天,检测细胞密度及活率,细胞密度应在4.5 -5.5 x10^6 cells/ml之间,细胞活率应大于95%。

3. 用37℃预热好的新鲜培养基,将细胞培养液稀释至3 x10^6 cells/ml,并混匀。

4. 制备BestoFectamine/质粒复合物:

1) 将BestoFectamine转染试剂颠倒4-5次混匀。

2) 用Opti-MEM将质粒和BestoFectamine转染试剂分别稀释(如30mL规模的转染,分别将30ug质粒和120ul的BestoFectamine转染试剂用1mL的Opti-MEM稀释)混匀并静止5分钟。

3) 将稀释的转染试剂与质粒混合,颠倒5-6次混匀。

5. 将BestoFectamine/质粒复合物室温放置10-20分钟后缓缓滴加到稀释好的细胞中。

6. 转染后的细胞置于37℃,8% CO2的摇床中培养。

7. 转染20小时后根据情况添加补料,培养5-7天后进行收获。

 

订购信息——

货号

描述

规格

储存条件

BTB-T01-010

BestoFectamine Transfection Reagent, 4ml

For 1L culture

2-8℃

BTB-T01-100

BestoFectamine Transfection Reagent, 10*4ml

For 10L culture

2-8℃



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