胶原酶NB——在组织解离中的应用方法


       溶组织梭状芽胞杆菌来源的胶原酶,是一种蛋白水解酶,作用机制是原位切割人或动物组织的三螺旋胶原分子。Nordmark胶原酶NB产品,特别适用于从各种组织中分离细胞,及干细胞传代。生产及质量要求严格按照药品生产质量标准进行,性能稳定、可靠的批间一致性及出色的产品性能。

Nordmark的胶原酶NB


GMP级别的酶

       用于组织解离的酶是组织工程及器官移植的关键原料。因此,Nordmark Biochemicals提供了卓越的GMP级胶原酶NB和中性蛋白酶NB,产品的生产符合欧盟良好生产规范(GMP)。 

1. 制造过程的TSE安全性已通过EDQM认证;

2. 批次内毒素水平低,并根据欧洲药典进行了不常见毒性测试;

3. 根据ICH指南进行病毒验证和稳定性研究的数据。


储存和分装

       所有胶原酶NB产品均以冻干粉形式提供,可在+2至+8°C下保存。 在防潮条件下,可以保持稳定且至少一年不失去活性。 胶原酶NB产品可溶于常见的缓冲液,例如HBSS。可以将重组酶进行无菌过滤,分装并在-20°C下保存一年。 应避免反复冻融。


组织消化的方法优化

       下表列出了针对不同种属、不同组织来源细胞进行分离,推荐的产品组合及使用方法。一般来说,胶原酶使用条件取决于待分离组织的类型和来源,以及组织分离步骤方法。 因此,下表的胶原酶NB浓度应视为优化参考条件,应通过监测、分析消化过程的进展,确定胶原酶的最佳使用方案。 根据Wünsch,胶原酶活性以PZ单位表示,在37°C和pH 7.4时显示最佳状态。 胶原酶需要钙才能发挥全部催化活性,建议使用2 mM Ca2+。

Nordmark的胶原酶NB


灭活和抑制剂

        通过冷却或稀释消化液来减少消化进程。

        胶原酶在高pH值下可逆失活,在低pH值下不可逆失活。 胶原酶的抑制剂是半胱氨酸,或螯合剂如EDTA。


产品优势


Nordmark的胶原酶NB


胶原酶NB在研究中的应用

胶原酶NB 1优质级是一种高度纯化的胶原酶,具有极低的蛋白水解活性。对于大多数应用,需要添加纯化的中性蛋白酶NB。

胶原酶NB 4标准级和胶原酶NB 4G证明级是具有均衡蛋白水解活性组合的粗纯胶原酶。

胶原酶NB 5无菌级的特点是具有与胶原酶NB 4标准级相似的酶活特性,但在无菌条件下生产(根据欧洲药典)。

胶原酶NB 8广谱纯化,包含更高的胶原酶和减少的蛋白水解活性。


符合GMP标准、符合临床要求的酶

       高度纯化的胶原酶NB 1 GMP级和中性蛋白酶NB GMP级显示的酶学性质分别与胶原酶NB 1优质级和中性蛋白酶NB相似。

       胶原酶NB 6 GMP级显示出与胶原酶NB 4标准等级相似的酶促性质,并且特别适合必须满足GMP要求的应用,例如组织工程,分离和专门用于移植到人类的干细胞传代。因此,在使用胶原酶NB 4标准级建立方法后,您可以轻松切换到胶原酶NB 6 GMP级。


表:针对不同种属、不同组织来源细胞进行分离,推荐的产品组合及使用方法

细胞类型

组织

物种

胶原酶NB

浓度

实验条件

备注

腺泡细胞

胰腺

人类

NB 8

0.05  0.1PZ U/ml

1h,37°C


脂肪细胞

脂肪

人类,小鼠

NB 4 (NB 5 or NB 6), NB 4G

0.2 – 0.3 PZ U/ ml * 

30 – 45 min, 37 °C


羊膜细胞

羊膜

人类

NB 8

3.5 – 5.5 PZ U/ml

3 – 5 h, 37 °C


心肌细胞

大鼠(成年)

NB 8

0.5 PZ U/ml 

45 – 60 min
(recirculation and digestion)

If required hyaluronidase,
pancreatin or DNAse I

人类

NB 8

0.8 – 1.0 PZ U/m

2 – 3.5 h, 37 °C


软骨细胞

软骨

小鼠(新生)

NP** and NB 4 (NB 5 or NB 6) 

1) NP: 0.5 – 1 DMC U/ml
2) NB 4: 0.3 PZ U/ml

1) NP: 15 – 20 min, 37 °C
2) collagenase: 30 – 45 min, 37 °C

Sequential digestion steps

人类

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.3 – 0.4 PZ U/ml

4 – 16 h, 37 °C

If required Neutral Protease NB

软骨细胞(关节)

软骨

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.2 – 0.3 PZ U/ml

14 – 16 h, 37 °C


软骨细胞(半月板)

纤维软骨

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.2 – 0.3 PZ U/ml

14 – 16 h, 37 °C


绒毛膜细胞

绒毛

人类

NB 8

3.5 – 5.5 PZ U/ml

3 – 5 h, 37 °C


嗜铬细胞

肾上腺

牛,大鼠

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.3 – 0.5 PZ U/ml

20 – 30 min, 37 °C


子宫内膜细胞

子宫内膜

人类

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.2 – 0.3 PZ U/ml

30 min, 37 °C


内皮细胞(HDMEC)

包皮

人类

NB 4 (NB 5 or NB 6), NB 4G 

0.5 – 0.7 PZ U/ml 

0.5 – 2 h, 37 °C


内皮细胞(HUVEC)

脐带

人类

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.15 – 0.25 PZ U/ml

0.5 – 2 h, 37 °C

If required hyaluronidase

上皮细胞

乳腺

小鼠

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.34 PZ U/ml

15 – 25 min, RT


甲状腺

人类

NB 4G 

0.25 – 0.3 PZ U/ml 

RT

If required dispase

成纤维细胞

皮肤

人类

NB 4G 

0.26 PZ U/ml

2 h, 37 °C


皮肤,结缔组织

鼠类

NB 4G 

0.2 – 0.5 PZ U/ml 

12 – 20 h, 37 °C


肝细胞

NB 8

0.2 – 0.3 PZ U/ml 

Perfusion and subsequent digestion


小鼠

NB 4G 

0.08 – 0.11 PZ U/ml

5 – 15 min, 37 °C
(perfusion 5 – 8 ml/min)

Total collagenase perfusion volume 90 –110 ml 

大鼠

NB 4G 

0.12 – 0.15 PZ U/ml

10 – 25 min, 37 °C
(perfusion 5 – 8 ml/min)

Total collagenase perfusion
volume 100 – 125 ml

肝细胞/肝星状细胞

人类

NB 4G 

0.25 – 0.35 PZ U/ml 

10 – 20 min, 37 °C


胰岛

胰腺

人类

NB 1 and NP**

Per gram tissue:
20 PZ U (NB 1) and 0.8 – 1.5 DMC U (NP)

15 – 30 min, 37 °C


鼠类

NB 8

1.5 – 1.7 PZ U/ml

14 – 17 min, 37 °C
(perfusion and subsequent digestion)


猪(成年)

NB 1 and NP** 

Per gram tissue:
15 – 18 PZ U (NB 1) and 0.8 – 1.3 DMC U (NP)

15 – 30 min, 37 °C


NB 8 and NP** 

Per gram tissue:
4.4 PZ U (NB 8) and 0.5 – 0.7 DMC U (NP)

37 °C


猪(新生儿)

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.17 – 0.2 PZ U/ml 

10 – 20 min, 37 °C


肺细胞

小鼠

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.2 PZ U/ml

1 h, 37 °C


肥大细胞

肠粘膜

人类

NB 4G

0.5 PZ U/ml 

1 h, 37 °C


黑色素瘤细胞

皮肤

小鼠

NB 8

0.12 PZ U/ml 

30 min, 37 °C


肌肉细胞

骨骼肌

人类

NB 8

0.4 – 0.6 PZ U/ml



神经元

背根神经节

人类,鼠类

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.15 – 0.25 PZ U/ml

30 – 60 min, 37 °C


卵母细胞

卵巢

非洲爪蟾

NB 4G

0.3 – 0.5 PZ U/ml

1.5 – 2 h, RT


成骨细胞

小鼠

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.15 – 0.25 PZ U/ml

5 – 10 min, 37 °C (4 – 5 repeats)
and 0.2 % dispase

Sequential digestion steps

人类

NB 8

1.5 – 2 PZ U/ml (NB 8) and 0.25 DMC U/ml (NP)

2 – 4 h, 37 °C


许旺氏细胞

坐骨神经/周围神经

鼠类

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.2 – 0.3 PZ U/ml

1 – 3 h, 37 °C

If required trypsin or hyaluronidase

干细胞

华通氏胶

人类

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.13 – 0.15 PZ U/ml 

1 – 6 h, 37 °C 

If required hyaluronidase 1 mg/ml

干细胞(ADSC)/前脂肪细胞

脂质体

人类,小鼠

NB 4 (NB 5 or NB 6), NB 4G

0.2 – 0.3 PZ U/ml *

30 – 60 min, 37 °C


肿瘤细胞

乳房,子宫,甲状腺,肺

人类

NB 8

3.5 – 5.5 PZ U/ml

3 – 5 h, 37 °C


结肠

人类

NB 4G 

0.5 – 1 PZ U/ml



干细胞传代

人胚胎干细胞(hESC)

人类

NB 4 (NB 5 or NB 6)

0.15 PZ U/ml

37 °C, 6 – 8 min


*0,1-0,15 PZ U/ml final collagenase concentration after addition of adipose tissue ** Neutral Protease NB






订购信息

 

货号

是否GMP

名称

规格

N0002779

Yes

Collagenase NB 6 GMP Grade

1 g

N0002880

Yes

Collagenase NB 6 GMP Grade

100 mg

N0002937

Yes

Collagenase NB 1 GMP Grade

≥ 2000 U (PZ)

N0002936

Yes

Neutral Protease NB GMP Grade

≥ 100 U (DMC)

N0003554

Yes

Collagenase AF-1 GMP Grade

≥ 2000 U (PZ)

N0003553

Yes

Neutral Protease AF GMP Grade

≥ 100 U (DMC)

N0003716

Yes

GMP Cell Isolation Kit AF-1

1 kit

N0002778

No

Collagenase NB 5 Sterile Grade

1 g

S1745503

No

Collagenase NB 1 Premium Grade

≥ 2000 U (PZ)

S3030111

No

Neutral Protease NB

50 U (DMC)

S3030112

No

Neutral Protease NB

100 U (DMC)

S1743001

No

Premium Cell Isolation Kit NB 1

1 kit

S3030202

No

Neutral Protease NB High Active Grade

80 U (DMC)

S2020501

No

Clostripain NB

≥ 200 U

S1745601

No

Collagenase NB 8 Broad Range

250 mg

S1745602

No

Collagenase NB 8 Broad Range

1 g

S1747401

No

Collagenase NB 7D Gentle Grade

500 mg

S1747402

No

Collagenase NB 7D Gentle Grade

1 g

S1747403

No

Collagenase NB 7D Gentle Grade

5 g

S1746501

No

Collagenase NB 4G Proved Grade

500 mg

S1746502

No

Collagenase NB 4G Proved Grade

1 g

S1746503

No

Collagenase NB 4G Proved Grade

5 g

S1745402

No

Collagenase NB 4 Standard Grade

500 mg

S1745401

No

Collagenase NB 4 Standard Grade

1 g

S1745403

No

Collagenase NB 4 Standard Grade

5 g


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